Laboratoire de diagnostic aquatique
Comme on perd souvent un temps très précieux à envoyer des échantillons au laboratoire et à attendre les résultats des analyses, j’ai investi moi-même pour développer en profondeur les activités de mon laboratoire et le « Laboratoire de diagnostic aquatique » a été créé.
– Analyse de l’eau : chimique et bactériologique :
Détermination photométrique des paramètres, analyse des métaux lourds, mesure de la pression d’infection bactérienne, tests de sensibilité pour la désinfection de l’eau
– Examen bactériologique des tissus et organes :
Isolement d’Aeromonas/Pseudomonas principalement à partir d’ulcères, de reins/mildiou, de liquide abdominal. Tests de sensibilité pour déterminer l’efficacité de divers antibiotiques
– Analyse du sang : hématologie, biochimie et cytologie.
Détermination mineure ou majeure des paramètres sanguins avec examen cytologique contigu d’un frottis sanguin pour l’interprétation d’un tableau inflammatoire ou non inflammatoire.
– PCR : analyse de l’ADN viral/bactérien de tissus et d’organes.
Le dépistage du KHV (Koi Herpes Virus) et du CEV (sleeping sickness virus) sont les 2 tests les plus courants mais toute une batterie d’analyses aquacoles est possible comme le SVCV, WSSV, Streptococcus, Flavobacterium, Aeromonas Salmonicida…
Je souhaite envoyer un échantillon pour analyse au laboratoire
Analyse de l’eau
Le principe est le suivant : des réactifs sont ajoutés à une quantité mesurée d’eau et l’appareil mesure alors la diffusion à travers un faisceau lumineux et la convertit en un nombre numérique.
L’eau des étangs contient également des bactéries. Plus la situation est mauvaise, plus la pression d’infection est élevée pour le poisson ou, en d’autres termes, le risque d’infection. Les bonnes bactéries sont indispensables dans un étang. Elles contribuent à l’équilibre biologique et sont de préférence aussi diversifiées que possible. Dans l’analyse bactériologique de l’eau, plusieurs séries de dilutions de l’eau de l’étang sont inoculées sur divers milieux nutritifs et les colonies formées sont comptées : numération bactérienne totale, Aermonas, Pseudomonas, Vibrios, Coliformes et autres Enterobacteriaceae, Shewanella Putrefaciens.
Examen bactériologique
flanc. Cela augmente encore la pression d’infection et tend à rendre les autres poissons malades également. Les infections bactériennes sont très contagieuses.
1. Un écouvillon stérile est utilisé pour prélever un échantillon au bord de la lésion, de préférence en profondeur dans la peau. Cet écouvillon peut être conservé dans un milieu de transport, c’est-à-dire un tube stérile spécial qui contient juste assez de nutriments pour permettre aux bactéries de survivre pendant un certain temps. Il est conservé au frais. Si vous souhaitez envoyer des échantillons à notre laboratoire, ce type d’écouvillon avec milieu de transport est indispensable pour que les agents pathogènes arrivent vivants au laboratoire.
2. Dès que possible, l’écouvillon est étalé sur un milieu nutritif spécial. Il contient les nutriments nécessaires à la croissance des bactéries que vous souhaitez examiner (à condition qu’elles soient présentes dans l’échantillon, bien entendu). Grâce à une technique spéciale, vous obtenez un effet de dilution de sorte que les bactéries se trouvent en colonies libres et peuvent être jugées selon leur forme, leur odeur, leur couleur, leur épaisseur,…
3. Il faut environ 24 à 36 heures pour que les colonies soient visibles. Pseudomonas spp. se développent plus lentement que les espèces d’Aeromonas Hydrophila. Les Aeromonas Salmonicida, quant à eux, se développent encore plus lentement. Les milieux nutritifs inoculés sont placés dans un incubateur spécial à cet effet. Les poissons étant à sang froid, ils ne seront pas incubés à 37°C mais à une température plus froide.
4. Lorsque les bactéries se sont bien développées, l’étape suivante consiste à les inoculer dans une culture dite pure. Parallèlement, certains tests biochimiques peuvent déjà être effectués pour commencer à déterminer le type de bactéries.
5. Enfin, les germes sont répartis uniformément sur un milieu nutritif spécial qui pénètre bien. Plusieurs comprimés d’antibiotiques sont ensuite placés par-dessus, ce qui permet de disperser une substance dans le milieu de croissance. Lorsque les bactéries ne se développent pas, cela signifie qu’elles sont sensibles au médicament ; lorsque les bactéries se développent, le diamètre de la zone autour du comprimé d’antibiotique est décisif pour déterminer si le médicament est efficace ou non.
Analyse du sang
Une analyse de sang se déroule en plusieurs étapes.
1. Tout d’abord, il y a le prélèvement de sang, pour lequel le poisson doit être complètement anesthésié. Une ponction est effectuée dans le vaisseau sanguin situé juste en dessous de la colonne vertébrale. Un travail délicat, donc !
2. Les poissons ne peuvent perdre que 0,5 % de leur poids en sang, sinon ils risquent d’entrer en état de choc. En d’autres termes, nous ne prélèverons du sang que lorsque le poisson est suffisamment gros et le volume de sang prélevé ne sera que de 0,5 à 1 ml.
3. Ensuite, il faut avant tout s’occuper du poisson afin d’endiguer l’hémorragie et de permettre au poisson de recommencer à absorber de l’oxygène et à rester humide. D’autre part, le sang doit être traité le plus rapidement possible, car une fois qu’il est sorti du corps, il commence à coaguler.
4. 1 goutte de sang est étalée sur une lame pour un examen microscopique direct (cytologie).
5. Une petite quantité de sang est prélevée dans un tube capillaire pour déterminer l’hématocrite (qui est le rapport entre les cellules sanguines et le plasma). Cela se fait dans le laboratoire d’entraînement.
6. Le reste du sang est conservé dans un tube d’héparine et transporté au cabinet ou pipetté directement dans le Fat Scan pour analyse.
7. Le sang de poisson est très fragile et doit être manipulé avec précaution. Dans le cas contraire, les cellules éclatent (hémolyse) et les résultats sont perturbés.
PCR
PCR est l’abréviation de Polymerase Chain Reaction (réaction en chaîne de la polymérase). En termes simples, il s’agit d’une technique dans laquelle des morceaux ou des séquences spécifiques d’ADN provenant d’agents pathogènes sont propagés à un niveau détectable. Ce test est si spécifique qu’un résultat positif a une valeur diagnostique très élevée. Les virus, les bactéries ainsi que les champignons ou les parasites peuvent être testés pour autant qu’un test soit disponible pour l’élément que vous souhaitez tester. Par souci de simplicité, nous ne parlerons dans les paragraphes suivants que des virus.
Dans le cas d’un résultat négatif, cela peut avoir plusieurs significations :
1. Aucun virus n’est présent dans l’ensemble du poisson et celui-ci est exempt de virus.
2. La quantité de virus présente dans l’échantillon est trop faible et le résultat est faussement négatif. Dans le cas des virus de l’herpès, cela peut être le cas de ce que l’on appelle les « porteurs ». Le virus est alors caché dans les ganglions nerveux, par exemple, et est à peine détectable. Un résultat négatif peut également être obtenu en cas d’infection lorsque l’échantillon a été prélevé au mauvais endroit. Par exemple, si vous prélevez le mauvais organe ou si vous n’avez pas prélevé une lésion inflammatoire avec un virus actif. J’ai déjà constaté que chez les poissons atteints de KHV, une moitié de branchie peut être négative alors que l’autre est positive !
Le cabinet dispose d’un appareil iiPCR, ou « isothermal insulated PCR ». Cette technique permet d’obtenir un résultat à court terme. Dans les 24 heures suivant le prélèvement de l’échantillon, le résultat peut déjà être connu. Le test est validé et certifié par l’OIE* ! (*Office Internationale des Epizooties)
