Diagnostic Aquatisch Labo
Comme on perd souvent un temps très précieux à envoyer des échantillons au laboratoire et à attendre les résultats des analyses, j’ai investi moi-même pour développer en profondeur les activités de mon laboratoire et le « Laboratoire de diagnostic aquatique » a été créé.
Ce laboratoire est, comment pourrait-il en être autrement, spécialisé dans le diagnostic des maladies des poissons uniquement.
– Analyse de l’eau : chimique et bactériologique :
Détermination photométrique des paramètres, analyse des métaux lourds, mesure de la pression d’infection bactérienne, tests de sensibilité pour la désinfection de l’eau.
– Examen bactériologique des tissus et des organes :
Isolement d’Aeromonas/Pseudomonas principalement à partir d’ulcères, de reins/mildiou, de liquide abdominal. Tests de sensibilité pour déterminer l’efficacité de divers antibiotiques.
– Analyse du sang : hématologie, biochimie et cytologie.
Détermination mineure ou majeure des paramètres sanguins avec examen cytologique contigu d’un frottis sanguin pour l’interprétation d’un tableau inflammatoire ou non inflammatoire.
– PCR : analyse de l’ADN viral/bactérien des tissus et des organes.
Le dépistage du KHV (Koi Herpes Virus) et du CEV (sleeping sickness virus) sont les 2 tests les plus courants mais toute une batterie d’analyses aquacoles sont possibles telles que SVCV, WSSV, Streptococcus, Flavobacterium, Aeromonas Salmonicida…
Analyse d’eau
Le laboratoire dispose d’un photomètre qui peut commencer à mesurer des paramètres chimiques avec précision, plus précisément que les appareils utilisés lors des visites à domicile.
Le principe est le suivant : des réactifs sont ajoutés à une quantité mesurée d’eau et l’appareil utilise un faisceau lumineux pour mesurer la diffusion et la convertir en un nombre numérique.
L’eau d’un étang contient également des bactéries. Plus il y a de mauvaises bactéries, plus la pression d’infection est élevée pour les poissons, autrement dit le risque d’infection. Les bonnes bactéries sont indispensables dans un étang, elles contribuent à l’équilibre biologique et sont de préférence aussi diversifiées que possible. Lors d’une analyse bactériologique de l’eau, plusieurs séries de dilutions de l’eau de l’étang sont inoculées sur différents milieux nutritifs et les colonies formées sont comptées : nombre total de bactéries, Aermonas, Pseudomonas, Vibrios, Coliformes et autres Enterobacteriaceae, Shewanella Putrefaciens.
Recherche bacteriologic
Je vois très souvent des poissons avec des ulcères. Par coïncidence, cela peut se produire après une blessure, mais en général, c’est simplement dû à une mauvaise hygiène, à une pression d’infection élevée, à des poissons affaiblis, à des parasites, etc. Les bactéries se multiplient alors massivement sur les points faibles tels que les nageoires, le nez, le dos et les flancs.
les nageoires, le nez, le dos et les flancs. Les bactéries se multiplient alors massivement sur les points faibles tels que les nageoires, le nez, le dos et le flanc. Les infections bactériennes sont très contagieuses.
1. Un écouvillon stérile est utilisé pour prélever un échantillon au bord de la lésion, de préférence en profondeur dans la peau. Cet écouvillon peut être conservé dans un milieu de transport, c’est-à-dire un tube stérile spécial qui contient juste assez de nutriments pour permettre aux bactéries de survivre pendant un certain temps. Ce milieu est conservé au frais. Si vous souhaitez envoyer des échantillons à notre laboratoire, ce type d’écouvillon avec le milieu de transport est essentiel pour que les germes arrivent vivants au laboratoire.
2. Dès que possible, l’écouvillon est étalé sur un milieu nutritif spécial. Ce milieu contient des nutriments permettant la croissance des bactéries que vous souhaitez examiner (à condition qu’elles soient présentes dans l’échantillon, bien entendu). Une technique spéciale permet d’obtenir un effet de dilution, de sorte que les bactéries se trouvent en colonies libres et peuvent être évaluées en fonction de leur forme, de leur odeur, de leur couleur, de leur épaisseur, etc.
3. Il faut environ 24 à 36 heures pour que les colonies soient visibles. Les Pseudomonas spp. se développent plus lentement que les espèces d’Aeromonas Hydrophila. Les Aeromonas Salmonicida, quant à eux, se développent encore plus lentement. Les milieux nutritifs inoculés sont placés dans un incubateur spécial à cet effet. Les poissons étant à sang froid, ils ne seront pas incubés à 37°C mais à une température plus froide.
4. Lorsque les bactéries se sont bien développées, l’étape suivante consiste à les inoculer dans ce que l’on appelle une culture pure. Parallèlement, certains tests biochimiques peuvent déjà être effectués pour commencer à déterminer le type de bactérie.
5. Enfin, les germes sont répartis uniformément sur un milieu nutritif spécial qui pénètre bien. Plusieurs comprimés d’antibiotiques sont ensuite placés sur ce milieu, ce qui permet de répandre une substance dans tout le milieu de croissance. Lorsque les bactéries ne se développent pas, cela signifie qu’elles sont sensibles au médicament. Lorsque les bactéries se développent, le diamètre de la zone autour du comprimé d’antibiotique est décisif pour déterminer si le médicament est efficace ou non.
Analyse de sang
Une analyse de sang se déroule en plusieurs étapes.
1. Tout d’abord, il y a la prise de sang, pour laquelle le poisson doit être complètement anesthésié. Il est piqué dans le vaisseau sanguin qui passe juste en dessous de la colonne vertébrale. Un travail délicat!
2. Les poissons ne peuvent perdre que 0,5 % de leur poids corporel en sang, sinon ils risquent d’entrer en état de choc. En d’autres termes, nous ne commençons à prélever du sang que lorsque le poisson est suffisamment gros et le volume de sang prélevé ne sera que de 0,5 à 1 ml.
3. Ensuite, il faut avant tout s’occuper du poisson pour que l’hémorragie soit stoppée et que le poisson puisse recommencer à absorber de l’oxygène et à rester humide. D’autre part, le sang doit être traité le plus rapidement possible, car dès qu’il sort du corps, il coagule.
4. Une goutte de sang est étalée sur une lame pour un examen microscopique direct (cytologie).
5. Une petite quantité de sang est prélevée dans un tube capillaire pour déterminer l’hématocrite (c’est-à-dire le rapport entre les cellules sanguines et le plasma). Cette opération est effectuée dans le laboratoire d’entraînement.
6. Le reste du sang est conservé dans un tube d’héparine et apporté au cabinet ou pipeté directement dans le Fat Scan pour analyse.
7. Le sang de poisson est très fragile et doit être manipulé avec précaution. Sinon, les cellules éclatent (hémolyse) et les résultats sont faussés.
PCR
PCR est l’abréviation de Polymerase Chain Reaction (réaction en chaîne de la polymérase). En termes simples, il s’agit d’une technique dans laquelle des morceaux ou des séquences spécifiques d’ADN provenant de pathogènes sont propagés à un niveau détectable. Ce test est si spécifique qu’un résultat positif a une valeur diagnostique très élevée. Les virus, les bactéries ainsi que les champignons ou les parasites peuvent être testés pour autant qu’un test soit disponible pour l’élément que vous souhaitez tester. Par souci de commodité, nous ne parlerons que des virus dans les paragraphes suivants.
Un résultat négatif peut avoir plusieurs significations :
1. Aucun virus n’est présent dans l’ensemble du poisson et celui-ci est exempt de virus.
2. L’échantillon contenait trop peu de virus et le résultat est faussement négatif. Dans le cas des herpèsvirus, cela peut être le cas de ce que l’on appelle les « porteurs ». Le virus est alors caché dans les ganglions nerveux, par exemple, et est difficilement détectable. Parfois, un résultat négatif pour une infection peut également être obtenu lorsque l’échantillon est prélevé au mauvais endroit. Par exemple, si l’on a prélevé le mauvais organe ou si l’on n’a pas prélevé un point d’infection avec un virus actif. J’ai déjà eu l’occasion de constater que chez des poissons infectés par le KHV, une moitié de branchie peut être négative alors que l’autre est positive !
Le cabinet dispose d’un appareil iiPCR, ou « isothermal insulated PCR ». Cette technique permet d’obtenir un résultat dans un délai très court. Dans les 24 heures suivant l’échantillonnage, le résultat peut déjà être connu. Le test est validé et certifié par l’OIE* ! (*Office Internationale des Epizooties)
